Calculadora de temperatura de fusión del cebador

Introduce ADN en dirección 5′→3′, un cebador por línea. Nombre opcional: Fwd: ATGC…. Se aceptan espacios y minúsculas; se omiten las líneas vacías o que empiezan por #. Una línea inválida detiene el cálculo para no perder ningún cebador. Hasta {max} cebadores de 2–{len} bases cada uno.

Modelo térmico

Tm usa los parámetros de vecinos más próximos para ADN/ADN perfectamente apareado de SantaLucia (1998), tabla 2, las correcciones terminales y la corrección entrópica de sodio dependiente de la longitud (ecuación 8). El orden de las bases importa: igual longitud y contenido GC no siempre dan la misma Tm. No se suponen fosfatos terminales.

Concentraciones

El campo indica la concentración de la hebra cebadora en nM. En modo PCR, se desprecia la concentración de la hebra diana; la concentración efectiva es la del cebador. En modo dúplex de ADN, cada hebra complementaria distinta tiene la concentración introducida, y la efectiva es la mitad. Una secuencia autocomplementaria utiliza la concentración introducida de esa única especie y la corrección entrópica de simetría.

Límites

Este modelo describe un dúplex perfectamente apareado, sin recomendar una temperatura de hibridación PCR. No modela Mg²⁺, K⁺, Tris, dNTPs, DMSO, errores de apareamiento, horquillas ni dímeros. El sodio se limita a 10–1000 mM; la corrección se ajustó a 10–300 mM. Aparece un aviso por debajo de 8 o por encima de 60 bases, o por encima de 300 mM. El ADN largo puede fundirse en varias transiciones.

La regla opcional de Wallace, 2(A+T)+4(G+C), solo orienta, sin sal ni concentración; su intervalo habitual es 14–20 bases. CSV exporta ambas estimaciones, secuencias y ajustes sin redondear e independientemente del idioma.